Für das ELISA-Protokoll sind Kontrollproben erforderlich

Der Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ist ein leistungsstarker analytischer biochemischer Assay, der Antikörper und Farbveränderungen zur Identifizierung einer Substanz nutzt. Es wird in der Immunologie häufig zum Nachweis des Vorhandenseins von Antikörpern oder Antigenen in einer Probe eingesetzt. Die Genauigkeit und Zuverlässigkeit des ELISA hängt maßgeblich von der Verwendung geeigneter Kontrollproben im gesamten Protokoll ab. Dieser Artikel befasst sich mit den wesentlichen Kontrollproben, die für den ELISA erforderlich sind, um die Gültigkeit und Reproduzierbarkeit der Testergebnisse sicherzustellen.

Positive und negative Kontrollen


  • Positive Kontrolle
Eine Positivkontrolle ist ein integraler Bestandteil des ELISA-Protokolls und dient als Benchmark zur Bestätigung, dass der Test wie vorgesehen funktioniert. Bei dieser Kontrolle handelt es sich um eine Probe, von der bekannt ist, dass sie das Zielantigen oder den Zielantikörper in einer Konzentration enthält, die mit dem Assay zuverlässig nachgewiesen werden kann. Das Vorhandensein eines positiven Signals von der Positivkontrolle zeigt die ordnungsgemäße Funktion der ELISA-Reagenzien und des Protokolls an. Es bietet einen Referenzpunkt, mit dem die Testproben verglichen werden können.


  • Negativkontrolle
Umgekehrt enthält die Negativkontrolle weder das Zielantigen noch den Antikörper. Dies ist entscheidend für die Identifizierung unspezifischer Bindungen oder Hintergrundrauschen im Assay. Eine Negativkontrolle hilft bei der Unterscheidung zwischen einem wirklich positiven Ergebnis und einem Hintergrundsignal und stellt so die Spezifität des Tests sicher. Bei dieser Kontrolle handelt es sich in der Regel um einen Puffer oder ein Serum, dem der Zielanalyt fehlt.

Standards


Standards sind bekannte Konzentrationen des Analyten, die zur Erstellung einer Kalibrierungskurve in quantitativen ELISA-Assays verwendet werden. Sie ermöglichen die Bestimmung der Analytkonzentration in Testproben durch den Vergleich ihrer Signale mit der Standardkurve. Um die Genauigkeit der Quantifizierung sicherzustellen, müssen Standards genauso behandelt werden wie die Testproben.

Proben- und Reagenzrohlinge


  • Probenrohling
Der Probenleerwert, oft auch als Assay-Leerwert bezeichnet, enthält alle Komponenten des Assays außer dem Analyten. Es wird verwendet, um das Spektrophotometer auf eine Absorption von Null einzustellen und so sicherzustellen, dass die gemessene Absorption auf den interessierenden Analyten zurückzuführen ist. Der Probenleerwert hilft bei der Korrektur der Absorption, die von anderen Komponenten im Test stammt.
  • Reagenzienleerwert
Der Reagenzienblindwert umfasst alle Reagenzien mit Ausnahme des primären Antikörpers (im Fall des indirekten ELISA) oder des Antigens (im Fall des direkten ELISA). Diese Kontrolle ist wichtig für die Identifizierung unspezifischer Wechselwirkungen zwischen dem sekundären Antikörper und den Testkomponenten, mit Ausnahme der primären Antikörper-Antigen-Wechselwirkung.

Spike-and-Recovery and Linearity-of-Dilution Controls


  • Spike and recovery control
This control involves adding a known amount of the target analyte to the test sample and then performing the ELISA to assess whether the added analyte can be accurately recovered. Spike-and-recovery experiments help in evaluating the assay's accuracy in complex sample matrices.


  • Linearity of Dilution Control
To confirm that the ELISA results are consistent across a range of sample concentrations, a linearity-of-dilution control is performed. This involves serially diluting a sample known to contain the target analyte and comparing the measured concentrations to the expected values. Consistency across dilutions indicates that the assay can reliably quantify the analyte at different concentrations.

Abschluss


Verweise


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16th Jul 2024 Shanza Riaz

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